Inmunofluorescencia

Aspirar el medio de los pozos Lavar con PBS 1X 3-4 veces Lavar con PBS-saponina 0,05% Permeabilizar y fijar con acetona fría (-20ºC) si las células crecen sobre cristal, y si crecen sobre plástico, citofix-citoperm durante 10 minutos a -20ºC Aspirar el fijador, lavar 3-4 veces con PBS frío Añadir los anticuerpos diluídos en PBS-saponina 0,05% (1/200) y el control de isotipo e incubar sobre hielo y en oscuridad durante 40 minutos Lavar con PBS-saponina 0,02% 4 veces Añadir medio de montaje (Vectshield)

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Cultivo de bactetias competentes

Antes de empezar: 1 tubo de bacterias competentes 2.5 µl de "mix de ligación" 300 µl SOC media Protocolo: Descongelar 1 tubo de bacterias competentes sobre hielo Añadir al tubo 2,5 µl de "mix de ligación", mezclar con la punta de la pipeta Incubar 20 min sobre hielo Hacer un "heat-shock" incubando durante 30 segundos a 42 ºC los tubos sin agitar, y incubar sobre hielo durante 2 min Añadir 300 µl de SOC media Incubar a 37 ºC durante 1 h

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Tratamiento de células contaminadas con mycoplasma

Se debe suplementar el medio de cultivo de las celulas con25 µg/ml de Plasmocin™ Treatment(1:1000 del stock que esta a 25 mg/ml;100 µl de Plasmocin™ Treatment en 100 ml de medio de cultivo), y se puede combinar con penicilina/streptomicina. Hacer el subcultivo de un cultivo que esté proliferando activamente y sembrarlo con medio de cultivo suplementado con Plasmocin. Cambiar el medio por medio fresco conteniendo Plasmocin a cada 3 o 4 días durante 2 semanas. Subcultivar si hiciera falta. Cambiar el medio al final del periodo de tratamiento por medio fresco sin Plasmocin y a los 2 días, sin que el medio esté amarillo, recoger 100 µl de medio y congelar a -20ºC pra hacer los tests. La concentración profilatica del plasmocin es de 5 µg/ml que se debe utilizar en los demás cultivos que no estén contaminados durante las semanas de tratamiento

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